pcr技術(shù)原理是什么（pcr技術(shù)原理）

baidianfeng365 2024-03-01 145 0條評(píng)論

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摘要： 您好,今天小編胡舒來(lái)為大家解答以上的問(wèn)題。pcr技術(shù)原理是什么，pcr技術(shù)原理相信很多小伙伴還不知道,現(xiàn)在讓我們一起來(lái)看看吧！1、PCR原理：DNA的半保留復(fù)制是生物進(jìn)化和傳代的重...

您好,今天小編胡舒來(lái)為大家解答以上的問(wèn)題。pcr技術(shù)原理是什么，pcr技術(shù)原理相信很多小伙伴還不知道,現(xiàn)在讓我們一起來(lái)看看吧！

1、PCR原理：DNA的半保留復(fù)制是生物進(jìn)化和傳代的重要途徑。

2、雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解旋成單鏈，在DNA聚合酶的參與下，根據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則復(fù)制成同樣的兩分子拷貝。

3、PCR技術(shù)的基本原理類(lèi)似于DNA的天然復(fù)制過(guò)程，其特異性依賴(lài)于與靶序列兩端互補(bǔ)的寡核苷酸引物。

4、PCR由變性--退火--延伸三個(gè)基本反應(yīng)步驟構(gòu)成：①模板DNA的變性：模板DNA經(jīng)加熱至93℃左右一定時(shí)間后，使模板DNA雙鏈或經(jīng)PCR擴(kuò)增形成的雙鏈DNA解離，使之成為單鏈，以便它與引物結(jié)合，為下輪反應(yīng)作準(zhǔn)備；②模板DNA與引物的退火（復(fù)性）：模板DNA經(jīng)加熱變性成單鏈后，溫度降至55℃左右，引物與模板DNA單鏈的互補(bǔ)序列配對(duì)結(jié)合；③引物的延伸：DNA模板--引物結(jié)合物在72℃、DNA聚合酶（如TaqDNA聚合酶）的作用下，以dNTP為反應(yīng)原料，靶序列為模板，按堿基互補(bǔ)配對(duì)與半保留復(fù)制原理，合成一條新的與模板DNA鏈互補(bǔ)的半保留復(fù)制鏈。

5、重復(fù)循環(huán)變性--退火--延伸三過(guò)程就可獲得更多的“半保留復(fù)制鏈”，而且這種新鏈又可成為下次循環(huán)的模板。

6、每完成一個(gè)循環(huán)需2～4分鐘，2～3小時(shí)就能將待擴(kuò)目的基因擴(kuò)增放大幾百萬(wàn)倍。

7、擴(kuò)展資料：特異性強(qiáng) PCR反應(yīng)的特異性決定因素為：①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；②堿基配對(duì)原則；③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性；④靶基因的特異性與保守性。

8、其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。

9、引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對(duì)原則的。

10、聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性，使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行，結(jié)合的特異性大大增加，被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。

11、再通過(guò)選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū)，其特異性程度就更高。

12、靈敏度高 PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的，能將皮克(pg=10-12g)量級(jí)的起始待測(cè)模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。

13、能從100萬(wàn)個(gè)細(xì)胞中檢出一個(gè)靶細(xì)胞；在病毒的檢測(cè)中，PCR的靈敏度可達(dá)3個(gè)RFU(空斑形成單位)；在細(xì)菌學(xué)中最小檢出率為3個(gè)細(xì)菌。

14、PCR反應(yīng)的延伸溫度一般選擇在70～75℃之間，常用溫度為72℃，過(guò)高的延伸溫度不利于引物和模板的結(jié)合。

15、PCR延伸反應(yīng)的時(shí)間，可根據(jù)待擴(kuò)增片段的長(zhǎng)度而定，一般1Kb以?xún)?nèi)的DNA片段，延伸時(shí)間1min是足夠的。

16、3～4kb的靶序列需3～4min；擴(kuò)增10Kb需延伸至15min。